对于病毒感染的梨树苗，可采用哪些方法培育成

由于梨树感染病毒后，终生带毒，持久危害，无法用药剂治疗; 而且绝大多数梨树病毒在自然条件下未发现传毒介体，主要通过 嫁接传染。因此，培育无病毒母本树，栽培无病毒苗木是防治梨树 病毒病的根本措施。培育梨无病毒母本树的方法主要有3种，即 热处理脱毒、茎尖培养脱毒和茎尖培养结合热处理脱毒。

(1)热处理脱毒技术

①热处理脱毒技术原理37T：〜38T：高温能够抑制病毒增殖及病毒在梨苗体内扩散，梨苗本身在该温度条件下仍可以生长，因 此可利用病毒和寄主植物对髙温忍耐性的差异，使植物的生长速 度超过病毒的扩散速度，得到一小部分不含病毒的新梢从而达到 脱除病毒的目的。

②热处理脱毒方法春季取待脱毒品种接穗切接于盆栽实生 杜梨砧木上，翌年2月上中旬将该盆栽苗移人温室，待苗木萌动 后，放人热处理箱中(可设恒温和变温2种处理)。恒温热处理，温 度控制在371 士IX：，处理时间为28〜30天>变温热处理，温度为 32t和38*C每隔8小时变换1次，处理时间为60天。处理结束 后从该盆栽苗上剪取0. 8〜1厘米嫩梢，劈接或皮下接于盆栽实生 杜梨砧木嫩梢上，套小塑料袋保湿，前1〜2周遮荫，待成活后去掉 塑料袋并移入田间进行检测。

由于热处理脱毒法要求的设备条件比较简单，脱毒操作比较 容易，因此应用早，也广泛，但该技术的脱毒效率较低。温度 和时间是影响热处理脱毒法脱毒效果的两个主要的因素. Bhardwa丨等发现，在热空气处理过程中，温度越高、时间越长，脱 毒效果就越好，但是同时植物的生存率却呈下降趋势。因此，温度 选择时应兼顾脱毒效果和植物耐热性。洪霓等(1995)在梨病毒脱 除研究中采用了 2种处理，一是恒温处理，温度控制在37°C 士 1°0»二是变温处理，32X：和38*0每隔8小时变换一次^变温热处 理具有处理过程中植株死亡率低和脱毒率较高的特点，而恒温热 处理嫩梢嫁接成活率较高。因此，在实际应用中应根据具体情况 选择方法。该法对嫩梢嫁接技术要求较高，所取嫩梢越短脱毒率 越高，但嫁接成活率亦越低，故一般嫩梢长度以0. 8〜1厘米为宜。 洪霓等(1995〉研究结果表明，采用热处理法可以脱除梨脉黄病毒、 梨环纹花叶病毒和榲梓矮化病毒，但苹果茎沟病毒较难脱除，其脱 毒率为恒温热处理47.1 %、变温热处理64. 3%。

①茎尖培养脱毒技术的原理茎尖培养脱毒的原理是:植物 体内病毒靠维管束系统移动，分生组织中没有维管束存在，病毒只 能靠胞间连丝移动，速度很慢，难以追上生长活跃的分生组织，所 以旺盛生长的根尖、茎尖一般都无病毒或很少有病毒分布。植物 体不含病毒的部分很小,一般不超过0. 5毫米，切取0. 5毫米以下 大小的茎尖进行培养才可以脱除病毒。

②茎尖培养脱毒方法在梨树新梢生长快的时期(我国北 方为5月中下旬)，采集生长旺盛、长2〜3厘米的顶梢，先用流水 冲洗5〜10分钟，去掉小叶，乙酵浸泡0.5分钟，蒸馏水冲洗后放 入0.1%升汞中消毒5〜10分钟，无菌水浸洗3〜5次，取出后在 解剖镜下迅速剥取0. 2〜0. 5毫米大小的茎尖，接种在MS附加 BA(0. 5〜1.5 毫克/升)、IBA(0.1〜0. 3 毫克/升)、GA3(0. 2〜8. 5毫克/升)、琼脂(5. 5克)及蔗糖(30克)的培养基上进行分离 培养。培养成活后的试管苗按芽编号，经繁殖，生根移栽或直接嫩 梢嫁接在实生砧木上后，移人田间，进行病毒检测。

茎尖培养脱毒主要的影响因素是茎尖大小。一般要求茎尖 长度小于0. 5毫米。通常切取茎尖越小，脱毒效果越好，但是茎尖 培养成活率变低。为此，目前多将热处理与茎尖培养相结合，以获 得较理想的脱毒和分化效果。

(2) 茎尖培养结合热处理脱毒技术

①原理热处理与茎尖培养相结合之所以能够提髙脱毒效 果，是由于热处理抑制了病毒繁殖扩散速度，使植物本身所具有的 顶端免疫区扩大，从而有利于切取较大的茎尖，提髙培养成活率和 脱毒效率。

②脱毒方法热处理与茎尖培养相结合的脱毒方法有2种。

热处理后茎尖培养《从恒温或变温热处理后的盆苗上取嫩梢,剥取1〜1. 5毫米茎尖进行分离培养，消毒过程和培养基闻茎尖培养脱毒。

试管苗热处理:将待脱毒试管苗转接后，在常温下(25*C)继代 培养15天，置恒温培养箱中(32D培养1周，然后升温至37V热 处理20〜50天，剥取1毫米茎尖培养。

(4>其他脱毒技术除上面介绍的3种脱毒技术以外，还有微 嫁接、抗病毒药剂等脱毒技术。对于在离体条件下难于生长发育 或者不易生根的品种，在脱毒时可采用微嫁接的方法，将分生组织 嫁接到试管中繁殖的砧木上，以得到完整的脱毒植株。将抗病毒 化学药物,如三氮唑核苷(病毒唑)、5-二氢尿嘧啶(DHT)、双乙酰- 二氢-5-氮尿嘧啶等，直接注射到带病毒的植株上，或者加到植株 生长的培养基上，再切取茎尖进行组织培养，可提高脱毒率和成活 率，罗晓芳等(1的6)在培养基中加人病毒唑，脱除了 2种苹果潜 隐病毒。这些方法目前在梨树脱毒中还少有应用。

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